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              常見6種Western Blot封閉液的優缺點

              發布時間:2022-03-17瀏覽:78次

              封閉是Western Blot 至關重要的一部分, 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結合,為成功的WB奠定基礎。雖然這個步驟操作簡單,但是封閉液的選擇確是很多科研人員的難題。為了讓大家更方便的選擇適合自己實驗的封閉液,這里給大家介紹6種不同的封閉液,以及它們的優缺點。
               
              1、脫脂奶粉
              便宜而且最好買的封閉劑就屬脫脂奶粉了。無論是從化學制品公司還是從超市購買,都可以直接拿來使用。通常封閉液的濃度為 2.5-5% (w/v)。但值得注意的是,脫脂奶粉是許多種蛋白質的混合物,其中含有酪蛋白,是一種磷蛋白。如果你的目標蛋白是磷蛋白的話,千萬不要選擇脫脂奶粉,否則會有很多背景信號。即使你的目標蛋白不是磷蛋白,因為是蛋白質的混合物,所以也容易產生較高的背景信號。
               
              2、牛血清白蛋白(BSA)
              牛血清白蛋白是從牛血清中提純之后的一種球蛋白,是除了脫脂奶粉之外,非常常用的封閉劑。通常含有BSA的封閉液的濃度為2-5%(w/v)。但大家也可 以根據自己實驗的需要來改變濃度,因為價格比較高,所以很多研究人員都是用盡可能低而有效的濃度。雖然BSA不是磷蛋白而且是單一蛋白,但是提純過程中有 可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物,這些蛋白都可以和哺乳動物抗體產生交叉反應,會增加非特異性背景信號 。
               
              3、全血清
              全血清是許多蛋白質的混合物,例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等,同樣可以被用來當做封閉劑。大家對它的使用率很低,因為跟脫脂奶粉和BSA相比,并沒有什么突出的好處,但價格卻更貴。通常使用的濃度為 5-10%(w/v)。像BSA一樣,它含有免疫球蛋白和血清蛋白,會和哺乳動物抗體產生交叉反應。
               
              4、魚膠
              用魚膠當封閉液是從豬皮膠演變而來的。魚膠是從冷水魚的皮膚中提取出來的,即使在溫度較低的情況下也會不會凝固。通常使用的濃度為0.1-5% (w/v)。不像脫脂奶粉和BSA,它不含有任何的血清蛋白,所以就不會和哺乳動物抗體產生交叉反應,大大降低了背景信號。但是魚膠不能用來封閉生物素- 抗生物素抗體蛋白系統,因為它含有內源性生物素。
               
              5、聚乙烯吡咯烷酮
              PVP 是傳統封閉液的非蛋白質性質的替代品。雖然早在1993年就有文獻發表,在封閉技術上卻是很新的產品。PVP是一種水溶性多聚物,可以很快和硝酸纖維素和PVDF膜結合。通常使用的濃度在0.5-2%(w/v),而且通常會和其他封閉劑一起使用。PVP 在用于檢測較小目標蛋白的時候非常有效。
               
              6、商品化封閉液
              商品化封閉液通常含有提純過的蛋白,用這個封閉液的好處就是你可以確定里面不含有磷蛋白、免疫球蛋白、白蛋白、生物素 等其他封閉液中難以避免的成分。當然,價格也就更貴。每個商品化封閉液都有自己的Protocol,基本照做就沒問題,而且封閉時間很快。
               
              相信大家現在對各種封閉液都有了更全面的了解??偟膩碚f,封閉液的選擇基于三樣事情:抗體、目標蛋白和檢測系統。但是要想找到適合自己目標蛋白的封閉液,并不簡單。除了排出一些很明顯不合適的,剩下的就需要多花點時間嘗試不同種類、不同濃度的封閉液,才能找到適合的。

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